IPTG (isopropyl-β-D-thiogalactoside) သည် အလွန်အမင်း မခံမယူနိုင်သော β-galactosidase အလွှာ၏ analogue တစ်ခုဖြစ်သည်။IPTG ၏အစပြုမှုအောက်တွင်၊ inducer သည် repressor ပရိုတင်းနှင့်ရှုပ်ထွေးသောပုံစံကိုဖန်တီးနိုင်သည်၊ ထို့ကြောင့် repressor protein ၏ပုံစံကိုပြောင်းလဲသွားစေရန်၊ ၎င်းသည်ပစ်မှတ်မျိုးဗီဇနှင့်ပေါင်းစပ်မရနိုင်စေရန်နှင့်ပစ်မှတ်ဗီဇကိုထိရောက်စွာဖော်ပြသည်။ထို့ကြောင့် စမ်းသပ်မှုအတွင်း IPTG ၏အာရုံစူးစိုက်မှုကို မည်သို့ဆုံးဖြတ်သင့်သနည်း။ပိုကြီးလေ ပိုကောင်းလေလား။
ဦးစွာ၊ IPTG induction နိယာမကို နားလည်ကြပါစို့- E. coli ၏ lactose operon (ဒြပ်စင်) တွင် β-galactosidase၊ permease နှင့် acetyltransferase တို့ကို အသီးသီး encode လုပ်သော structural genes သုံးခု၊ Z, Y နှင့် A တို့ပါရှိသည်။lacZ သည် lactose ကို ဂလူးကို့စ်နှင့် galactose အဖြစ်သို့၊ သို့မဟုတ် allo-lactose အဖြစ်သို့၊lacY သည် ပတ်ဝန်းကျင်ရှိ lactose ကို ဆဲလ်အမြှေးပါးမှတဆင့် ဖြတ်သန်းပြီး ဆဲလ်အတွင်းသို့ ဝင်ရောက်စေပါသည်။lacA သည် acetyl အုပ်စုအား acetyl-CoA မှ β-galactoside သို့ လွှဲပြောင်းပေးသည်၊ ၎င်းသည် Toxic effect ကို ဖယ်ရှားပေးပါသည်။ထို့အပြင်၊ Operating sequence O၊ စတင်သည့် sequence P နှင့် regulatory gene I တစ်ခုရှိသည်။ I gene code သည် operator sequence ၏ အနေအထား O နှင့် ချိတ်ဆက်နိုင်သော repressor protein တစ်ခုဖြစ်ပြီး operon (meta) ကို ဖိနှိပ်ထားပြီး၊ ပိတ်ထား။catabolic gene activator ပရိုတင်း-CAP binding site သည် အစပျိုးသည့် sequence P. P sequence၊ O sequence နှင့် CAP binding site တို့ကို အတူတကွ ဖွဲ့စည်းထားသည့် lac operon ၏ စည်းမျဉ်းနယ်မြေဖြစ်သည်။ဗီဇထုတ်ကုန်များ၏ ပေါင်းစပ်ဖော်ပြမှုကို ရရှိစေရန် အင်ဇိုင်းသုံးမျိုး၏ ကုဒ်ဗီဇများကို တူညီသော စည်းမျဉ်းနယ်မြေက ထိန်းညှိထားသည်။
lactose မရှိသောအခါ၊ lac operon (meta) သည် ဖိနှိပ်မှုအခြေအနေတွင် ရှိနေသည်။ဤအချိန်တွင်၊ PI မြှင့်တင်မှုအစီအစဥ်၏ထိန်းချုပ်မှုအောက်တွင် I sequence မှဖော်ပြသော lac repressor သည် RNA polymerase ကို P sequence နှင့်ချိတ်ဆက်ခြင်းမှကာကွယ်ပေးပြီး transcription အစပြုခြင်းကိုဟန့်တားသော O sequence နှင့်ချိတ်ဆက်ထားသည်။lactose ရှိသောအခါ၊ lac operon (meta) ကို ဤ operon (meta) စနစ်တွင် လှုံ့ဆော်ပေးနိုင်သည်၊ တကယ့် inducer သည် lactose ကိုယ်တိုင်မဟုတ်ပါ။Lactose သည် ဆဲလ်ထဲသို့ ဝင်ရောက်ပြီး β-galactosidase ဖြင့် ဓာတ်ပြုပြီး allolactose အဖြစ်သို့ ပြောင်းလဲသည်။နောက်ပိုင်းတွင်၊ inducer မော်လီကျူးအနေဖြင့်၊ repressor ပရိုတင်းနှင့် ချိတ်ဆက်ပြီး O sequence နှင့် transcription မှ repressor protein ၏ dissociation ကို ဖြစ်ပေါ်စေသည့် ပရိုတင်းဖွဲ့စည်းပုံကို ပြောင်းလဲစေသည်။Isopropylthiogalactoside (IPTG) သည် allolactose နှင့် တူညီသောအာနိသင်ရှိသည်။၎င်းသည် ဘက်တီးရီးယားဖြင့် ဇီဝြဖစ်ပျက်ပြီး အလွန်တည်ငြိမ်သော အလွန်အစွမ်းထက်သော inducer ဖြစ်သောကြောင့် ဓာတ်ခွဲခန်းများတွင် တွင်ကျယ်စွာ အသုံးပြုပါသည်။
IPTG ၏ အကောင်းဆုံးအာရုံစူးစိုက်မှုကို မည်သို့ဆုံးဖြတ်ရမည်နည်း။ဥပမာအနေနဲ့ E. coli ကိုယူပါ။
အပြုသဘောဆောင်သော recombinant pGEX (CGRP/msCT) ပါရှိသော E. coli BL21 မျိုးရိုးဗီဇပြုပြင်ထားသောမျိုးကွဲကို 50μg·mL-1 Amp ပါဝင်သော LB အရည်ကြားခံအဖြစ်သို့ ဖောက်ထုတ်ပြီး 37°C တွင် ညတွင်းချင်း မွေးမြူသည်။အထက်ဖော်ပြပါ ယဉ်ကျေးမှုကို တိုးချဲ့ယဉ်ကျေးမှုအတွက် 50μg·mL-1 Amp ပါဝင်သော 50μg·mL-1 Amp လတ်ဆတ်သော 50mL လတ်ဆတ်သော LB အရည် 10 ပုလင်းထဲသို့ ထည့်သွင်းပြီး OD600 တန်ဖိုးသည် 0.6~0.8 ဖြစ်သောအခါ၊ IPTG ကို နောက်ဆုံးအာရုံစူးစိုက်မှုသို့ ပေါင်းထည့်ခဲ့သည်။၎င်းသည် 0.1၊ 0.2၊ 0.3၊ 0.4၊ 0.5၊ 0.6၊ 0.7၊ 0.8၊ 0.9၊ 1.0mmol·L-1 ဖြစ်သည်။တူညီသောအပူချိန်နှင့် တစ်ချိန်တည်းတွင် induction ပြီးနောက်၊ ၎င်းမှ ဘက်တီးရီးယားဖြေရှင်းချက် 1 mL ကိုယူကာ ဘက်တီးရီးယားဆဲလ်များကို အာရုံစူးစိုက်မှုဖြင့် စုဆောင်းကာ ပရိုတင်းဖော်ပြမှုအပေါ် မတူညီသော IPTG ပြင်းအားများ၏ လွှမ်းမိုးမှုကို ခွဲခြမ်းစိတ်ဖြာရန် SDS-PAGE တွင် ချထားပြီးနောက်၊ အကြီးဆုံးပရိုတင်းဖော်ပြချက်နှင့်အတူ IPTG အာရုံစူးစိုက်မှုကိုရွေးချယ်ပါ။
စမ်းသပ်ပြီးနောက်၊ IPTG ၏အာရုံစူးစိုက်မှုသည် တတ်နိုင်သမျှ မကြီးမားကြောင်း တွေ့ရှိလိမ့်မည်။အဘယ်ကြောင့်ဆိုသော် IPTG သည် ဘက်တီးရီးယားများကို အဆိပ်အတောက်ဖြစ်စေသော အရာတစ်ခုကြောင့်ဖြစ်သည်။အာရုံစူးစိုက်မှု ကျော်လွန်ပါက ဆဲလ်များကို သေစေနိုင်သည်။ယေဘူယျအားဖြင့် ပြောရလျှင် ဆဲလ်ထဲတွင် ပိုမိုပျော်ဝင်နိုင်သော ပရိုတင်းဓာတ်က ပိုကောင်းမည်ဟု မျှော်လင့်သော်လည်း IPTG ၏ အာရုံစူးစိုက်မှု မြင့်မားလွန်းသောအခါတွင် အများအပြားပါဝင်မှု ပမာဏကို ဖြစ်ပေါ်စေမည် ဖြစ်သည်။ခန္ဓာကိုယ်တွင် ပျော်ဝင်သော်လည်း ပရိုတင်းပမာဏ လျော့နည်းသွားသည်။ထို့ကြောင့်၊ အသင့်တော်ဆုံး IPTG အာရုံစူးစိုက်မှုသည် ပိုကောင်းသည်မဟုတ်သော်လည်း အာရုံစူးစိုက်မှုနည်းလေဖြစ်သည်။
မျိုးဗီဇဆိုင်ရာ အင်ဂျင်နီယာမျိုးကွဲများကို ပျိုးထောင်ခြင်းနှင့် စိုက်ပျိုးခြင်း၏ ရည်ရွယ်ချက်မှာ ပစ်မှတ်ပရိုတင်း၏ အထွက်နှုန်းကို တိုးမြင့်လာစေရန်နှင့် ကုန်ကျစရိတ်များကို လျှော့ချရန်ဖြစ်သည်။ပစ်မှတ်မျိုးရိုးဗီဇ၏ဖော်ပြမှုသည် strain ၏ကိုယ်ပိုင်အချက်များနှင့်ဖော်ပြချက်ပလာစမစ်ကြောင့်သာမက inducer ၏အာရုံစူးစိုက်မှု၊ induction temperature နှင့် induction time ကဲ့သို့သောအခြားပြင်ပအခြေအနေများကြောင့်လည်းသက်ရောက်မှုရှိသည်။ထို့ကြောင့်၊ ယေဘူယျအားဖြင့်၊ အမည်မသိပရိုတင်းကို မဖော်ပြမီ၊ သန့်စင်ခြင်းမပြုမီ၊ သင့်လျော်သောအခြေအနေများကိုရွေးချယ်ပြီး အကောင်းဆုံးစမ်းသပ်မှုရလဒ်များရရှိရန် induction အချိန်၊ အပူချိန်နှင့် IPTG အာရုံစူးစိုက်မှုကို လေ့လာရန် အကောင်းဆုံးဖြစ်သည်။
စာတိုက်အချိန်- ဒီဇင်ဘာ-၃၁-၂၀၂၁