Dithiothreitol (DTT) သည် အသုံးများသော ဓာတ်လျှော့ပစ္စည်းတစ်မျိုးဖြစ်ပြီး new green additive အဖြစ်လည်း လူသိများသည်။ ၎င်းသည် mercaptan အုပ်စုနှစ်ခု (-SH) ပါရှိသော မော်လီကျူးအော်ဂဲနစ်ဒြပ်ပေါင်းငယ်တစ်ခုဖြစ်သည်။ ၎င်း၏ ဓာတ်လျှော့ဂုဏ်သတ္တိများနှင့် တည်ငြိမ်မှုကြောင့် DTT ကို ဇီဝဓာတုဗေဒနှင့် မော်လီကျူးဇီဝဗေဒ စမ်းသပ်ချက်များတွင် ကျယ်ကျယ်ပြန့်ပြန့်အသုံးပြုကြသည်။
DTT ရဲ့ အဓိကအခန်းကဏ္ဍကတော့ ပရိုတင်းတွေနဲ့ အခြားဇီဝမော်လီကျူးတွေမှာ disulfide ချည်နှောင်မှုတွေကို လျှော့ချပေးဖို့ပါ။ disulfide ချည်နှောင်မှုဟာ ပရိုတင်းခေါက်သိမ်းမှုနဲ့ တည်ငြိမ်မှုရဲ့ အရေးကြီးတဲ့ အစိတ်အပိုင်းတစ်ခုဖြစ်ပေမယ့် reducible SDS-PAGE ခွဲခြမ်းစိတ်ဖြာမှု၊ ပရိုတင်းပြန်လည်ပေါင်းစပ်မှုနဲ့ ခေါက်သိမ်းမှုလိုမျိုး စမ်းသပ်မှုအခြေအနေအချို့မှာ ပရိုတင်းရဲ့ spatial structure ကို ဖော်ထုတ်ဖို့အတွက် disulfide ချည်နှောင်မှုကို thiol အုပ်စုနှစ်ခုအဖြစ် လျှော့ချဖို့ လိုအပ်ပါတယ်။ DTT ဟာ disulfide ချည်နှောင်မှုတွေနဲ့ ဓာတ်ပြုပြီး mercaptan အုပ်စုတွေအဖြစ် လျှော့ချပေးနိုင်တာကြောင့် ပရိုတင်းရဲ့ spatial structure ကို ဖွင့်လှစ်ပေးပြီး ခွဲခြမ်းစိတ်ဖြာဖို့နဲ့ ကိုင်တွယ်ဖို့ လွယ်ကူစေပါတယ်။
DTT ကို အင်ဇိုင်းလှုပ်ရှားမှုနှင့် တည်ငြိမ်မှုကို ကာကွယ်ရန်အတွက်လည်း အသုံးပြုနိုင်ပါသည်။ အင်ဇိုင်းဖြင့် ဓာတ်ကူပေးသော ဓာတ်ပြုမှုအချို့တွင် အင်ဇိုင်း၏ လှုပ်ရှားမှုကို အောက်ဆီဒင့်ဖြင့် လျှော့ချနိုင်သည်။ DTT သည် အောက်ဆီဒင့်များနှင့် ဓာတ်ပြုပြီး ၎င်းတို့ကို အန္တရာယ်မရှိသော အရာများအဖြစ် လျှော့ချပေးနိုင်သောကြောင့် အင်ဇိုင်း၏ လှုပ်ရှားမှုနှင့် တည်ငြိမ်မှုကို ကာကွယ်ပေးသည်။
β-mercaptoethanol (β-ME) ကဲ့သို့သော ရိုးရာလျှော့ချပေးသည့်ပစ္စည်းများနှင့် နှိုင်းယှဉ်ပါက DTT သည် ပိုမိုဘေးကင်းပြီး တည်ငြိမ်သော လျှော့ချပေးသည့်ပစ္စည်းအဖြစ် သတ်မှတ်ခံထားရသည်။ ၎င်းသည် ရေပျော်ရည်တွင် တည်ငြိမ်ရုံသာမက မြင့်မားသော အပူချိန်နှင့် အက်ဆစ်-ဘေ့စ် အခြေအနေများတွင် ၎င်း၏လျှော့ချပေးသည့်ဂုဏ်သတ္တိများကိုလည်း ထိန်းသိမ်းထားသည်။
DTT အသုံးပြုနည်းမှာ အတော်လေးရိုးရှင်းပါသည်။ ယေဘုယျအားဖြင့် DTT ကို သင့်လျော်သော buffer တွင် ပျော်ဝင်စေပြီး စမ်းသပ်စနစ်ထဲသို့ ထည့်သွင်းသည်။ DTT ၏ အကောင်းဆုံးပါဝင်မှုကို သီးခြားစမ်းသပ်မှုအရ ဆုံးဖြတ်ရန် လိုအပ်ပြီး ယေဘုယျအားဖြင့် 0.1-1 mM အတိုင်းအတာတွင် အသုံးပြုသည်။ ပါဝင်မှုနည်းခြင်းသည် ဆဲလ်ကြီးထွားမှုအပေါ် ဆိုးကျိုးများကို လျှော့ချနိုင်ပြီး ပစ်မှတ်ပရိုတင်းများ၏ အလွန်အကျွံဖော်ပြမှုကြောင့် ဆိုက်တိုအဆိပ်သင့်မှုကို လျှော့ချနိုင်သည်။ ပါဝင်မှုမြင့်ခြင်းသည် ဆဲလ်ဇီဝဖြစ်စဉ်ဆိုင်ရာ ဝန်ထုပ်ဝန်ပိုးကို အလွန်အကျွံဖြစ်စေပြီး ဆဲလ်ကြီးထွားမှုနှင့် ဖော်ပြမှုထိရောက်မှုကို ထိခိုက်စေနိုင်သည်။
အကောင်းဆုံးအာရုံစူးစိုက်မှုကို ဆုံးဖြတ်ရန်နည်းလမ်းမှာ မတူညီသောအာရုံစူးစိုက်မှုများတွင် IPTG induction စမ်းသပ်မှုများကို ပြုလုပ်ခြင်းဖြင့် ပစ်မှတ်ပရိုတင်း၏ expression level ကို အကဲဖြတ်ခြင်းဖြစ်သည်။ IPTG အာရုံစူးစိုက်မှုအမျိုးမျိုး (ဥပမာ 0.1 mM၊ 0.5 mM၊ 1 mM စသည်) ကို အသုံးပြု၍ အသေးစားယဉ်ကျေးမှုစစ်ဆေးမှုများကို ပြုလုပ်နိုင်ပြီး မတူညီသောအာရုံစူးစိုက်မှုများတွင် expression effect ကို target ပရိုတင်း၏ expression level ကို ထောက်လှမ်းခြင်းဖြင့် အကဲဖြတ်နိုင်သည် (ဥပမာ Western blot သို့မဟုတ် fluorescence detection)။ စမ်းသပ်မှုရလဒ်များအရ အကောင်းဆုံး expression effect ရှိသော အာရုံစူးစိုက်မှုကို အကောင်းဆုံးအာရုံစူးစိုက်မှုအဖြစ် ရွေးချယ်ခဲ့သည်။
ထို့အပြင်၊ အလားတူစမ်းသပ်မှုအခြေအနေများအောက်တွင် အသုံးများသော IPTG ပါဝင်မှုအပိုင်းအခြားကို နားလည်ရန် သက်ဆိုင်ရာစာပေများ သို့မဟုတ် အခြားဓာတ်ခွဲခန်းများ၏ အတွေ့အကြုံများကိုလည်း ရည်ညွှန်းနိုင်ပြီး စမ်းသပ်မှုလိုအပ်ချက်များအလိုက် အကောင်းဆုံးဖြစ်အောင် လုပ်ဆောင်ပြီး ချိန်ညှိနိုင်သည်။
အကောင်းဆုံး செறியாள்သည် မတူညီသော ဖော်ပြချက်စနစ်များ၊ ပစ်မှတ်ပရိုတင်းများနှင့် စမ်းသပ်မှုအခြေအနေများပေါ် မူတည်၍ ကွဲပြားနိုင်သောကြောင့် ဖြစ်ရပ်တစ်ခုချင်းစီအလိုက် အကောင်းဆုံးဖြစ်အောင် ပြုလုပ်သင့်ကြောင်း မှတ်သားထားရန် အရေးကြီးပါသည်။
အကျဉ်းချုပ်အားဖြင့် DTT သည် ပရိုတင်းများနှင့် အခြားဇီဝမော်လီကျူးများတွင် ဒိုင်ဆာလ်ဖိုက်ချည်နှောင်မှုများကို လျှော့ချရန်နှင့် အင်ဇိုင်းလှုပ်ရှားမှုနှင့် တည်ငြိမ်မှုကို ကာကွယ်ရန်အတွက် အသုံးများသော လျှော့ချရေးအေးဂျင့်တစ်ခုဖြစ်သည်။ ၎င်းကို ဇီဝဓာတုဗေဒနှင့် မော်လီကျူးဇီဝဗေဒ စမ်းသပ်ချက်များတွင် ကျယ်ကျယ်ပြန့်ပြန့် အသုံးပြုခဲ့ကြသည်။
ပို့စ်တင်ချိန်: ၂၀၂၃ ခုနှစ်၊ စက်တင်ဘာလ ၂၈ ရက်