Dithiothreitol (DTT) သည် အစိမ်းရောင် ပေါင်းထည့်မှုအသစ်ဟုလည်း လူသိများသော လျော့ချပေးသည့် အေးဂျင့်ဖြစ်သည်။၎င်းသည် mercaptan အုပ်စု (-SH) နှစ်ခုပါရှိသော သေးငယ်သော မော်လီကျူးအော်ဂဲနစ်ဒြပ်ပေါင်းတစ်ခုဖြစ်သည်။၎င်း၏ ဂုဏ်သတ္တိများ လျှော့ချခြင်းနှင့် တည်ငြိမ်မှုကြောင့် DTT ကို ဇီဝဓာတုဗေဒနှင့် မော်လီကျူး ဇီဝဗေဒ စမ်းသပ်မှုများတွင် တွင်ကျယ်စွာ အသုံးပြုခဲ့သည်။
DTT ၏ အဓိကအခန်းကဏ္ဍမှာ ပရိုတင်းများနှင့် အခြားဇီဝမော်လီကျူးများတွင် disulfide နှောင်ကြိုးများကို လျှော့ချရန်ဖြစ်သည်။disulfide နှောင်ကြိုးသည် ပရိုတိန်းခေါက်ခြင်းနှင့် တည်ငြိမ်မှု၏ အရေးကြီးသော အစိတ်အပိုင်းတစ်ခုဖြစ်သော်လည်း၊ လျှော့ချနိုင်သော SDS-PAGE ခွဲခြမ်းစိတ်ဖြာမှု၊ ပရိုတင်းပြန်လည်ပေါင်းစပ်ခြင်းနှင့် ခေါက်ခြင်းကဲ့သို့သော အချို့သောစမ်းသပ်အခြေအနေများတွင်၊ ၎င်းသည် spatial တည်ဆောက်မှုကို ဖော်ထုတ်ရန်အတွက် disulfide bond ကို လျှော့ချရန်လိုအပ်ပါသည်။ ပရိုတိန်း။DTT သည် ၎င်းတို့အား mercaptan အုပ်စုများသို့ လျှော့ချရန်အတွက် disulfide နှောင်ကြိုးများနှင့် တုံ့ပြန်နိုင်ပြီး၊ ထို့ကြောင့် ပရိုတင်း၏ spatial ဖွဲ့စည်းပုံကို ဖွင့်ပေးပြီး ခွဲခြမ်းစိတ်ဖြာရန်နှင့် ကိုင်တွယ်ရန် လွယ်ကူစေသည်။
အင်ဇိုင်းလုပ်ဆောင်ချက်နှင့် တည်ငြိမ်မှုကို ကာကွယ်ရန် DTT ကို အသုံးပြုနိုင်သည်။အချို့သော အင်ဇိုင်း-ဓာတ်ပြု တုံ့ပြန်မှုတွင်၊ အင်ဇိုင်း၏ လုပ်ဆောင်ချက်ကို oxidant ဖြင့် လျှော့ချနိုင်သည်။DTT သည် ၎င်းတို့အား အန္တရာယ်မရှိသော အရာများအဖြစ် လျှော့ချရန် ဓာတ်တိုးဆန့်ကျင်ပစ္စည်းများနှင့် တုံ့ပြန်နိုင်ပြီး အင်ဇိုင်း၏ လုပ်ဆောင်ချက်နှင့် တည်ငြိမ်မှုကို ကာကွယ်ပေးသည်။
β-mercaptoethanol (β-ME) ကဲ့သို့သော သမားရိုးကျ လျှော့ချအေးဂျင့်များနှင့် နှိုင်းယှဉ်ပါက၊ DTT သည် ပိုမိုဘေးကင်းပြီး ပိုမိုတည်ငြိမ်သော လျှော့ချအေးဂျင့်တစ်ခုဟု ယူဆပါသည်။၎င်းသည် aqueous solution တွင်တည်ငြိမ်ရုံသာမက မြင့်မားသောအပူချိန်နှင့် အက်ဆစ်အခြေခံအခြေအနေများအောက်တွင်၎င်း၏လျှော့ချဂုဏ်သတ္တိများကိုထိန်းသိမ်းထားသည်။
DTT ကိုအသုံးပြုခြင်းသည်အတော်လေးရိုးရှင်းပါသည်။ယေဘုယျအားဖြင့်၊ DTT ကို သင့်လျော်သော ကြားခံတစ်ခုတွင် ပျော်ဝင်ပြီးနောက် စမ်းသပ်မှုစနစ်သို့ ပေါင်းထည့်သည်။သီးခြားစမ်းသပ်ချက်အရ DTT ၏ အကောင်းဆုံးအာရုံစူးစိုက်မှုကို ဆုံးဖြတ်ရန်လိုအပ်ပြီး ယေဘုယျအားဖြင့် 0.1-1mM အကွာအဝေးတွင် အသုံးပြုသည်။အာရုံစူးစိုက်မှုနည်းခြင်းသည် ဆဲလ်ကြီးထွားမှုအပေါ် ဆိုးကျိုးများကို လျှော့ချနိုင်ပြီး ပစ်မှတ်ပရိုတင်းများ အလွန်အကျွံဖော်ပြခြင်းကြောင့် cytotoxicity ကို လျှော့ချနိုင်သည်။ပြင်းအား မြင့်မားမှုသည် ဆဲလ်များ ဇီဝဖြစ်စဉ်ဆိုင်ရာ ဝန်ထုပ်ဝန်ပိုးကို အလွန်အကျွံ ဖြစ်စေပြီး ဆဲလ်ကြီးထွားမှုနှင့် ထုတ်ဖော်မှု စွမ်းဆောင်ရည်ကို ထိခိုက်စေပါသည်။
အကောင်းဆုံးအာရုံစူးစိုက်မှုကို ဆုံးဖြတ်ရန်နည်းလမ်းမှာ မတူညီသောပြင်းအားများတွင် IPTG induction tests ပြုလုပ်ခြင်းဖြင့် ပစ်မှတ်ပရိုတင်း၏ဖော်ပြမှုအဆင့်ကို အကဲဖြတ်ရန်ဖြစ်သည်။သေးငယ်သောယဉ်ကျေးမှုစစ်ဆေးမှုများကို IPTG ပြင်းအားအကွာအဝေး (ဥပမာ 0.1 mM၊ 0.5 mM၊ 1 mM စသည်ဖြင့်) ကို အသုံးပြု၍ လုပ်ဆောင်နိုင်ပြီး ကွဲပြားသောပြင်းအားများတွင် ဖော်ပြသောအကျိုးသက်ရောက်မှုကို ပစ်မှတ်ပရိုတိန်း၏အသုံးအနှုန်းအဆင့်ကို ထောက်လှမ်းခြင်းဖြင့် အကဲဖြတ်နိုင်ပါသည်။ blot သို့မဟုတ် fluorescence detection)။စမ်းသပ်မှုရလဒ်များအရ အကောင်းဆုံးထုတ်ဖော်ပြောဆိုအကျိုးသက်ရောက်မှုရှိသော အာရုံစူးစိုက်မှုကို အကောင်းဆုံးအာရုံစူးစိုက်မှုအဖြစ် ရွေးချယ်ခဲ့သည်။
ထို့အပြင်၊ အလားတူစမ်းသပ်မှုအခြေအနေများအောက်တွင် အသုံးများသော IPTG အာရုံစူးစိုက်မှုအကွာအဝေးကို နားလည်ရန် သက်ဆိုင်ရာစာပေများ သို့မဟုတ် အခြားဓာတ်ခွဲခန်းများ၏ အတွေ့အကြုံများကို ကိုးကားပြီး စမ်းသပ်မှုလိုအပ်ချက်များနှင့်အညီ အကောင်းဆုံးဖြစ်အောင် ချိန်ညှိနိုင်သည်။
အကောင်းမွန်ဆုံးအာရုံစူးစိုက်မှုသည် မတူညီသောအသုံးအနှုန်းစနစ်များ၊ ပစ်မှတ်ပရိုတင်းများနှင့် စမ်းသပ်မှုအခြေအနေများပေါ်မူတည်၍ ကွဲပြားနိုင်သည်၊ ထို့ကြောင့် ဖြစ်ရပ်တစ်ခုချင်းအလိုက် အကောင်းဆုံးဖြစ်အောင် အကောင်းဆုံးလုပ်ဆောင်ရန် အရေးကြီးပါသည်။
အနှစ်ချုပ်အားဖြင့်၊ DTT သည် ပရိုတင်းများနှင့် အခြားဇီဝမော်လီကျူးများတွင် disulfide နှောင်ကြိုးများကို လျှော့ချရန်နှင့် အင်ဇိုင်းလုပ်ဆောင်ချက်နှင့် တည်ငြိမ်မှုကို ကာကွယ်ရန်အတွက် အသုံးများသော လျော့ချပေးသည့် အေးဂျင့်တစ်ခုဖြစ်သည်။ဇီဝဓာတုဗေဒနှင့် မော်လီကျူး ဇီဝဗေဒ စမ်းသပ်မှုများတွင် တွင်ကျယ်စွာ အသုံးပြုခဲ့သည်။
တင်ချိန်- စက်တင်ဘာ ၂၈-၂၀၂၃